大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)
細(xì)胞介紹
NR8383(正常大鼠，1983年)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-l,TGF-(3和IL-6,可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF-0前體。在博萊霉素刺激下，TGF-(3mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。1-10鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%。即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。
 
細(xì)胞特性
1)來源：肺；巨噬細(xì)胞
2)形態(tài)：巨噬細(xì)胞，半懸浮生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)細(xì)胞接受后的處理：
1)收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)約2-3h〇
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉秒娐?lián)。
 
細(xì)胞用途：僅供使用。
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
 
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
二.細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培
養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
 
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹句，將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。（該細(xì)胞建議使用*種方法，將所有細(xì)胞收集起來）
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管
中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
 
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。